マイクロダイアリシス
概要
脳内マイクロダイアリシスプローブを使用して、神経伝達物質とその他の代謝生成物の検出がインビボ、インビトロの両方で実行できます。ほとんどの場合、脳組織に埋め込んだり、血液微小透析用に使用されます。
マイクロダイアリシスはフローシステムで行こなわれます。透析溶液をプローブに流し透析され溶出した物質を含む透析溶液をHPLCや直接検出器で分析します。ほとんどの場合、HPLCでは電化学検出が高感度の理由で使用されますが、原則としては蛍光または吸収などの、どの検出器も使用できます。
PowerChromとe-corder
e-corderシステムはデータ記録用ChartソフトウェアまたはPowerChromソフトウェアを必要とします。PowerChrom280システムはPowerChromソフトウェアと専用記録ハードウェアで構成されています。
Chartソフトウェアを搭載のe-corder装置は、固定相液体を用いる実験にこの電極を使用する場合に、大変役立つシステムです。溶液がプローブから押し流される時の信号を、e-corder/ChartまたはPowerChrom280で記録できます。
PowerChromとe-corderは電気化学検出器を含むマイクロダイアリシス研究に使用される以下のメーカのHPLC検出器のほとんどのものに使用できます。
- Antec Leyden, 'Intro' 電気化学検出器
- BAS(Bioanalytical Systems), LC-4C 電気化学検出器
- Eicom
- ESA, Model 5200A 電気化学検出器
- GBC Scientific, LC1260 電気化学検出器
電気化学検出
プローブ内で電気化学検出が行われることがあります。
インビボ、インビトロ
この電極ではインビボ、またはインビトロ用の設定が数種類から選択できます。溶液を電極から押し流したり、または注入された液体を固定相として用いる実験にも使用することができます。
電極は以下と接続可能です。
PowerChromを使用したマイクロダイアリシス研究例
脳橋誘発無緊張症に関連した阻害アミノ酸放出における変化
インビボマイクロダイアリシス研究
T Kodama, Y-Y Lai and J M Siegel, Journal of
Neuroscience, 23, 1548-1554, 2003.
灌流液中のアミノ酸の濃度が蛍光検出器（励起340 nm、放出440nm)を使用したHPLC(EDT-300;Eicom)で算出され、PowerChromシステムで定量化されます。
無拘束ラットの皮質におけるブドウ糖と乳酸の動的変化を微小電極を使用してモニタリング
D. A. Jones, J. Ros, H. Landolt, M. Fillenz, and M. G. Boutelle, Journal
of Neurochemistry, 75, 1703-1708, 2000.
Dialysate was analysed on-line for glucose and lactate using a dual on-line assay. The assay is based on immobilised enzyme bed/ferrocene-mediated detection technology. A buffer (pH 7) containing the ferrocene monocarboxylic acid mediator is continuously pumped into the valve at a flow rate of 0.6 mL/min using an HPLC pump. Each assay system consists of a small enzyme bed reactor (1 mm x 20 mm, containing either glucose oxidase and horseradish peroxidase or lactate oxidase and horseradish peroxidase) and a downstream glassy carbon radial flow electrode held at -100 mV relative to an Ag/AgCl reference electrode. Valve switching and data collection were done using PowerChrom software.
側坐核内の局在性alpha-bungarotoxin-sensitive
ニコチン性レセプターがインビボニコチン刺激によるドーパミン分泌を調整
Y. Fu, S.G. Matta, W. Gao, and B.M. Sharp, Neuroscience, 101, 369-375,
2000.
Stimulation of dopamine (DA) secretion in the NAcc by systemic nicotine was inhibited by selectively administering a-bungarotoxin or methyllycaconitine directly into this region, whereas mecamylamine was ineffective. In vivo microdialysis of accumbal dopamine secretion and receptor antagonist blockade in both the ventral striatal nucleus accumbens and the midbrain ventral tegmental area were used. Microdialysates were analysed by an ESA Coulochem II 5200A electrochemical detector with an ESA 5041 high-sensitivity analytical cell. Electrochemical detection was performed at a potential of 220 mV with the current gain at 10 nA. Under these conditions, the limit of detection for DA was 100 fg per injection. Chromatographic data were collected and analysed with a PowerChrom system.
グルフォシネートアンモニウムがラットの小脳内のN-methyl D-aspartate
レセプターを介して一酸化窒素生成を刺激
Toshio Nakaki, Akira Mishima, Eiji Suzuki, Futoshi Shintani, and Tomoko
Fujii, Neuroscience Letters, 290, 209-212, 2000.
Nitric oxide production was estimated by the quantitation of nitrite/nitrate, the non-enzymatic oxidative products of nitric oxide. The amount of nitrite/nitrate was quantitated with an automatic system equipped with a liquid chromatograph and a reactor for the Griess reaction (ENO-100, Eicom, Kyoto, Japan), whereby nitrate was reduced to nitrite with a cadmium column. The absorbance of the reactant was measured at 540 nm with a flow-through spectrophotometer (NOD-10, Eicom). Data were collected and analysed with a Powerchrom system.
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